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2025-12-11
固定化酶技術(shù)通過物理或化學方法將酶束縛于載體上，使其能重復使用且易于分離。常見的四種方法及其優(yōu)缺點如下：1.吸附法含義：利用物理吸附力（如范德華力、氫鍵）或離子交換作用，將酶吸附在固體載體（如活性炭、多孔玻璃）表面。優(yōu)點：操作簡單、條件溫和，酶活力損失少，載體可重復使用。缺點：結(jié)合力較弱，易受pH、溫度或離子強度影響而解吸附，導致酶泄漏。2.共價結(jié)合法含義：通過共價鍵將酶蛋白的非必需側(cè)鏈基團（如氨基、羧基）與載體表面的功能基團偶聯(lián)。優(yōu)點：結(jié)合非常牢固，酶不易脫落，穩(wěn)定性好，可...2025-12-05
細胞自噬與凋亡是兩種重要的細胞程序性死亡方式，它們之間存在復雜的交互調(diào)控網(wǎng)絡，共同決定細胞的最終命運。一、交互作用方式協(xié)同促進細胞死亡：在特定條件下（如三氧-化二砷治療、神經(jīng)酰胺處理），自噬與凋亡可共同促進細胞死亡。當?shù)蛲鐾肥茏钑r，自噬可作為替代性死亡機制。相互拮抗作用：自噬通過維持細胞內(nèi)穩(wěn)態(tài)（如清除錯誤折疊蛋白、提供能量）抑制凋亡；而凋亡激活后，caspase會降解自噬關(guān)鍵蛋白（如Beclin-1）以終止自噬。能量支持關(guān)系：自噬產(chǎn)生的ATP為凋亡小體形成等過程提供能量支持...2025-11-27
核心結(jié)論：不建議重復使用完整ELISA試劑盒，但部分組件在特定條件下可有限復用。一、可嘗試復用的組件（需謹慎操作）1.酶標板非關(guān)鍵檢測時，可清洗后復用1-2次清洗方法：去離子水沖洗→0.1%SDS浸泡→超聲清洗→氮氣吹干風險：孔間吸附差異增大，靈敏度可能下降2.洗滌緩沖液過濾后最多重復使用2次需監(jiān)測pH值和吐溫20濃度二、必須一次性使用的組件標準品溶液（凍融會破壞濃度梯度）底物溶液（TMB見光分解，OPD易沉淀）終止液（強酸腐蝕孔板）生物素標記抗體（活性易衰減）三、復用建議1...2025-11-19
一、原理與操作流程雙抗體夾心法的核心在于利用兩種識別抗原不同表位的抗體：1.固相抗體包被：將一種特異性抗體固定在固相載體（如聚苯乙烯微孔板）表面，形成固相抗體層。2.抗原結(jié)合：加入待測樣本后，樣本中的抗原與固相抗體結(jié)合，形成固相抗體-抗原復合物，洗滌去除未結(jié)合物質(zhì)。3.酶標抗體結(jié)合：加入酶標記的第二種抗體，其與抗原的另一表位結(jié)合，形成“固相抗體-抗原-酶標抗體”夾心結(jié)構(gòu)。4.顯色檢測：加入底物后，酶催化底物產(chǎn)生有色產(chǎn)物，其光密度值與樣本中抗原濃度呈正相關(guān)。二、技術(shù)優(yōu)勢1.高特...2025-11-13
一、操作前準備儀器預熱：開機后需預熱20-30分鐘，確保光源穩(wěn)定，避免因未預熱導致數(shù)據(jù)漂移。波長校準：定期檢查波長準確度，使用濾光片或標準溶液驗證，確保測量波長的精確性。比色皿選擇：根據(jù)測量波長選用玻璃或石英比色皿，可見光區(qū)用玻璃皿，紫外光區(qū)必須用石英皿。二、樣品處理與測量比色皿使用：僅觸碰毛面，透光面避免指紋污染，清潔時用鏡頭紙輕擦。液體裝至三分之二高度，避免溢出或氣泡干擾。樣品放置：空白溶液調(diào)零后，再測樣品，確保光路對齊。測量順序從稀到濃，減少誤差累積。測量范圍：吸光度宜...2025-11-05
ELISA（酶聯(lián)免疫吸附試驗）是生物學和醫(yī)學研究中常用的檢測技術(shù)，主要包括直接法、間接法、競爭法和夾心法四種類型。每種方法都有其獨特的優(yōu)缺點，適用于不同的實驗需求。以下是它們的詳細對比：直接ELISA法原理：將抗原直接固定在微孔板上，加入酶標記的一抗進行檢測。優(yōu)點：操作流程簡短，實驗步驟少。無需使用二抗，避免了交叉反應的可能性。缺點：靈敏度較低，因為信號放大有限。一抗需要直接標記，成本較高且制備復雜。適用范圍：適用于快速檢測，但對靈敏度要求不高的實驗。間接ELISA法原理：抗...2025-10-28
一、污染類型識別細菌污染顯微鏡下可見球形或桿狀微生物，培養(yǎng)液迅速渾濁并散發(fā)異味，細胞生長停滯。真菌污染培養(yǎng)液保持清亮，但可見絲狀或珊瑚狀菌絲，細胞狀態(tài)逐漸惡化。支原體感染細胞生長緩慢，出現(xiàn)小黑點或空泡化，但培養(yǎng)液無明顯渾濁。黑膠蟲污染顯微鏡下可見點狀游動小體，對細胞生長影響較小，但可能干擾觀察。二、清除技術(shù)方案（一）細菌與真菌污染處理抗生素處理在培養(yǎng)基中添加慶大霉素（50-100μg/mL）或兩性霉素B（2.5μg/mL），連續(xù)處理3-5天。需注意長期使用可能影響細胞代謝。物...