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2025-12-11
固定化酶技術(shù)通過(guò)物理或化學(xué)方法將酶束縛于載體上，使其能重復(fù)使用且易于分離。常見(jiàn)的四種方法及其優(yōu)缺點(diǎn)如下：1.吸附法含義：利用物理吸附力（如范德華力、氫鍵）或離子交換作用，將酶吸附在固體載體（如活性炭、多孔玻璃）表面。優(yōu)點(diǎn)：操作簡(jiǎn)單、條件溫和，酶活力損失少，載體可重復(fù)使用。缺點(diǎn)：結(jié)合力較弱，易受pH、溫度或離子強(qiáng)度影響而解吸附，導(dǎo)致酶泄漏。2.共價(jià)結(jié)合法含義：通過(guò)共價(jià)鍵將酶蛋白的非必需側(cè)鏈基團(tuán)（如氨基、羧基）與載體表面的功能基團(tuán)偶聯(lián)。優(yōu)點(diǎn)：結(jié)合非常牢固，酶不易脫落，穩(wěn)定性好，可...2025-12-05
細(xì)胞自噬與凋亡是兩種重要的細(xì)胞程序性死亡方式，它們之間存在復(fù)雜的交互調(diào)控網(wǎng)絡(luò)，共同決定細(xì)胞的最終命運(yùn)。一、交互作用方式協(xié)同促進(jìn)細(xì)胞死亡：在特定條件下（如三氧-化二砷治療、神經(jīng)酰胺處理），自噬與凋亡可共同促進(jìn)細(xì)胞死亡。當(dāng)?shù)蛲鐾肥茏钑r(shí)，自噬可作為替代性死亡機(jī)制。相互拮抗作用：自噬通過(guò)維持細(xì)胞內(nèi)穩(wěn)態(tài)（如清除錯(cuò)誤折疊蛋白、提供能量）抑制凋亡；而凋亡激活后，caspase會(huì)降解自噬關(guān)鍵蛋白（如Beclin-1）以終止自噬。能量支持關(guān)系：自噬產(chǎn)生的ATP為凋亡小體形成等過(guò)程提供能量支持...2025-11-27
核心結(jié)論：不建議重復(fù)使用完整ELISA試劑盒，但部分組件在特定條件下可有限復(fù)用。一、可嘗試復(fù)用的組件（需謹(jǐn)慎操作）1.酶標(biāo)板非關(guān)鍵檢測(cè)時(shí)，可清洗后復(fù)用1-2次清洗方法：去離子水沖洗→0.1%SDS浸泡→超聲清洗→氮?dú)獯蹈娠L(fēng)險(xiǎn)：孔間吸附差異增大，靈敏度可能下降2.洗滌緩沖液過(guò)濾后最多重復(fù)使用2次需監(jiān)測(cè)pH值和吐溫20濃度二、必須一次性使用的組件標(biāo)準(zhǔn)品溶液（凍融會(huì)破壞濃度梯度）底物溶液（TMB見(jiàn)光分解，OPD易沉淀）終止液（強(qiáng)酸腐蝕孔板）生物素標(biāo)記抗體（活性易衰減）三、復(fù)用建議1...2025-11-19
一、原理與操作流程雙抗體夾心法的核心在于利用兩種識(shí)別抗原不同表位的抗體：1.固相抗體包被：將一種特異性抗體固定在固相載體（如聚苯乙烯微孔板）表面，形成固相抗體層。2.抗原結(jié)合：加入待測(cè)樣本后，樣本中的抗原與固相抗體結(jié)合，形成固相抗體-抗原復(fù)合物，洗滌去除未結(jié)合物質(zhì)。3.酶標(biāo)抗體結(jié)合：加入酶標(biāo)記的第二種抗體，其與抗原的另一表位結(jié)合，形成“固相抗體-抗原-酶標(biāo)抗體”夾心結(jié)構(gòu)。4.顯色檢測(cè)：加入底物后，酶催化底物產(chǎn)生有色產(chǎn)物，其光密度值與樣本中抗原濃度呈正相關(guān)。二、技術(shù)優(yōu)勢(shì)1.高特...2025-11-13
一、操作前準(zhǔn)備儀器預(yù)熱：開(kāi)機(jī)后需預(yù)熱20-30分鐘，確保光源穩(wěn)定，避免因未預(yù)熱導(dǎo)致數(shù)據(jù)漂移。波長(zhǎng)校準(zhǔn)：定期檢查波長(zhǎng)準(zhǔn)確度，使用濾光片或標(biāo)準(zhǔn)溶液驗(yàn)證，確保測(cè)量波長(zhǎng)的精確性。比色皿選擇：根據(jù)測(cè)量波長(zhǎng)選用玻璃或石英比色皿，可見(jiàn)光區(qū)用玻璃皿，紫外光區(qū)必須用石英皿。二、樣品處理與測(cè)量比色皿使用：僅觸碰毛面，透光面避免指紋污染，清潔時(shí)用鏡頭紙輕擦。液體裝至三分之二高度，避免溢出或氣泡干擾。樣品放置：空白溶液調(diào)零后，再測(cè)樣品，確保光路對(duì)齊。測(cè)量順序從稀到濃，減少誤差累積。測(cè)量范圍：吸光度宜...2025-11-05
ELISA（酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)）是生物學(xué)和醫(yī)學(xué)研究中常用的檢測(cè)技術(shù)，主要包括直接法、間接法、競(jìng)爭(zhēng)法和夾心法四種類型。每種方法都有其獨(dú)特的優(yōu)缺點(diǎn)，適用于不同的實(shí)驗(yàn)需求。以下是它們的詳細(xì)對(duì)比：直接ELISA法原理：將抗原直接固定在微孔板上，加入酶標(biāo)記的一抗進(jìn)行檢測(cè)。優(yōu)點(diǎn)：操作流程簡(jiǎn)短，實(shí)驗(yàn)步驟少。無(wú)需使用二抗，避免了交叉反應(yīng)的可能性。缺點(diǎn)：靈敏度較低，因?yàn)樾盘?hào)放大有限。一抗需要直接標(biāo)記，成本較高且制備復(fù)雜。適用范圍：適用于快速檢測(cè)，但對(duì)靈敏度要求不高的實(shí)驗(yàn)。間接ELISA法原理：抗...2025-10-28
一、污染類型識(shí)別細(xì)菌污染顯微鏡下可見(jiàn)球形或桿狀微生物，培養(yǎng)液迅速渾濁并散發(fā)異味，細(xì)胞生長(zhǎng)停滯。真菌污染培養(yǎng)液保持清亮，但可見(jiàn)絲狀或珊瑚狀菌絲，細(xì)胞狀態(tài)逐漸惡化。支原體感染細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢，出現(xiàn)小黑點(diǎn)或空泡化，但培養(yǎng)液無(wú)明顯渾濁。黑膠蟲污染顯微鏡下可見(jiàn)點(diǎn)狀游動(dòng)小體，對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)影響較小，但可能干擾觀察。二、清除技術(shù)方案（一）細(xì)菌與真菌污染處理抗生素處理在培養(yǎng)基中添加慶大霉素（50-100μg/mL）或兩性霉素B（2.5μg/mL），連續(xù)處理3-5天。需注意長(zhǎng)期使用可能影響細(xì)胞代謝。物...