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2016-09-22
Western實(shí)驗(yàn)中，經(jīng)過SDS-PAGE電泳分離后的蛋白質(zhì)樣品需經(jīng)過“轉(zhuǎn)膜”步驟，從PAGE膠轉(zhuǎn)移到膜上固定，才能用各種方法進(jìn)行WesternBlot的檢測和顯示，而且為了防止沒有電場的情況下已經(jīng)分離的蛋白條帶擴(kuò)散，轉(zhuǎn)膜要盡快進(jìn)行。轉(zhuǎn)膜是對Westernzui終結(jié)果影響zui大的一步，轉(zhuǎn)膜質(zhì)量的好壞直接決定了實(shí)驗(yàn)結(jié)果的好壞。下面介紹一些實(shí)用技巧，趕緊Get起來吧。1.膜的選擇膜的選擇主要從實(shí)驗(yàn)?zāi)康暮蛯?shí)驗(yàn)要求來考慮，例如做分子量小于20kDa的小蛋白，0.45um的膜是不可取...2016-09-18
近日，英國倫敦大學(xué)的研究人員發(fā)表在Cell子刊Current-Biology上的一項(xiàng)研究調(diào)查了成年大腦通訊中斷的驅(qū)動(dòng)機(jī)制，尤其是主要負(fù)責(zé)學(xué)習(xí)和記憶的海馬體內(nèi)神經(jīng)細(xì)胞間連接的缺失，并發(fā)現(xiàn)了隱藏在大腦神經(jīng)連接缺失背后的關(guān)鍵機(jī)制，這些缺失能導(dǎo)致小鼠失憶。一種蛋白質(zhì)被激活能讓小鼠失憶。圖片來源：倫敦大學(xué)學(xué)院神經(jīng)細(xì)胞間連接的破壞是阿爾茨海默氏癥等疾病的早期特征，并能引發(fā)記憶和思維衰退等令人痛苦的癥狀，但其背后的生物學(xué)機(jī)制目前尚不明確。近日，發(fā)表在Cell子刊《當(dāng)代生物學(xué)》（Curren...2016-09-13
外泌體是一種直徑為30-100nm的納米級(jí)脂質(zhì)包裹體結(jié)構(gòu)，內(nèi)部包裹了蛋白、mRNA和microRNA等物質(zhì)，包括腫瘤細(xì)胞在內(nèi)的幾乎所有類型的細(xì)胞，都可以產(chǎn)生并釋放外泌體。外泌體由細(xì)胞分泌釋放出來，在血液等體液內(nèi)傳播，zui后又可被其他細(xì)胞吞噬，是細(xì)胞間通訊的重要介質(zhì)。外泌體目前被視為特異性分泌的膜泡，參與細(xì)胞間通訊，對外泌體的研究興趣日益增長，從外泌體研究方向而言，干細(xì)胞、免疫、microRNA、靶向給藥等都是熱門研究領(lǐng)域，2013年諾貝爾生物/醫(yī)學(xué)獎(jiǎng)授予三位在細(xì)胞囊泡方面貢...2016-09-08
ELISA實(shí)驗(yàn)常見問題分析異常結(jié)果描述原因分析對策白板顯色步驟結(jié)束后，酶標(biāo)板所有孔均無顏色。陽性對照不顯色。試劑已過效期，或不同試劑盒組分混用檢查試劑的組分及批號(hào)，確認(rèn)未過期以及所有組分均屬對應(yīng)的試劑盒。不同試劑盒或不同批號(hào)的試劑不能混用。錯(cuò)加、漏加試劑底物、顯色劑A或B嚴(yán)格按說明書的步驟操作，加完試劑后可觀察一下液面高度是否一致，以減少漏加現(xiàn)象。洗板及加樣過程中，酶標(biāo)受污染失活失去催化顯色劑顯色的能力確認(rèn)盛酶標(biāo)的容器不含酶抑制劑如疊氮鈉等，確認(rèn)配制洗液的容器已洗干凈。終止液...2016-09-05
二抗在IF、IHC、WB、ELISA、FC、EMSA、IP和CHIP等多種研究應(yīng)用中起到重要作用。正確選擇二抗可以增加信號(hào)檢測，減少背景和非特異染色，優(yōu)化您的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。如何選擇二抗？1.根據(jù)一抗的種屬來源：GoatantiMouseIgG(H+L),HRP2.根據(jù)一抗的類別亞型：GoatantiMouseIgG(H+L),FITCGoatAntiRabbitIgG(γ),PEGoatAntiMouseIgM,FITC3.根據(jù)實(shí)驗(yàn)檢測方法：熒光、化學(xué)發(fā)光、顯色？Goatanti...2016-08-31
經(jīng)甲醛固定的部分組織細(xì)胞，因固定過程中可能會(huì)形成醛鍵或羧甲基而封閉部分抗原決定簇，使免疫組化標(biāo)記敏感性明顯降低，因此在染色前，有些抗原需進(jìn)行修復(fù)或暴露?？乖迯?fù)方法可分為化學(xué)方法和物理方法?；瘜W(xué)方法是以酶消化方法，常用胰蛋白酶及胃蛋白酶，配制濃度與消化時(shí)間要適度。常用的物理方法有單純加熱、微波處理和高壓加熱。在選用這三種方法時(shí)，浸泡切片的緩沖液的離子強(qiáng)度和pH、加熱的溫度和時(shí)間均影響著抗原修復(fù)效果。1、pH的應(yīng)用范圍及選擇抗原修復(fù)液的pH非常重要，有效的抗原修復(fù)pH要比修復(fù)液...2016-08-24
良好的免疫組化染色切片是正確判斷染色結(jié)果的基礎(chǔ)和前提。由于免疫組化染色過程中存在很多步驟或環(huán)節(jié)，每一個(gè)步驟或環(huán)節(jié)都可能影響到染色的zui終結(jié)果，因此，要做好一張高質(zhì)量的免疫組化切片并不是一件非常容易的事。需要病理技術(shù)員和病理醫(yī)生密切配合、相互協(xié)調(diào)、共同努力才能保證做出合格的免疫組化切片。雖然免疫組化染色可以存在各種各樣的問題，但從染色的結(jié)果看，一般可分為兩類：無色片（即無陽性信號(hào)）和“雜音”染色片（有陽性信號(hào)）。一、無色片染色結(jié)束后，切片中見不到任何陽性信號(hào)。這是常規(guī)工作中比...